豬流行性腹瀉病毒

產(chǎn)品型號： 96T/48T

所屬分類(lèi)：動(dòng)物疾病類(lèi)ELISA快速檢測試劑盒

產(chǎn)品時(shí)間：2023-07-26

簡(jiǎn)要描述：豬流行性腹瀉病毒價(jià)格公道、*，售后服務(wù)完整，并提供免費代檢測服務(wù)！本試劑盒用于測定豬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）水平。

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豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）ELISA試劑盒

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定豬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）水平。

豬流行性腹瀉病毒實(shí)驗原理：

  本試劑盒采用雙抗原夾心法測定血清或血漿中豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）。用純化的豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）抗原結合，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）的存在與否。

豬流行性腹瀉病毒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽(yáng)性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對照孔中加入陰性對照、陽(yáng)性對照（標準品）100μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液50μl，然后再加待測樣品50μl。輕輕晃動(dòng)混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl（或一滴），空白孔除外。 

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl（或一滴），再加入顯色劑B 50μl（或一滴），輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

10. 終止：每孔加終止液50μl（或一滴），終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

結果判定：

  試驗有效性：陽(yáng)性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.15

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.10（陰性對照平均值低于0.05按0.05計算）

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）陰性

  陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）陽(yáng)性

注意事項

1．操作嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長(cháng)檢測時(shí)，參考波長(cháng)為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

氯霉素檢測條

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